液相色谱检测生物药中蛋白质杂质残留

液相色谱检测生物药中蛋白质杂质残留

目前临床上已经规模应用生物技术药物，为制药工业带来了变革和机遇，但在其生产过程中涉及细菌的培养、蛋白质的分离纯化等，过程中非常容易引入生产用细菌中的其他蛋白质，或在贮存环境掺杂相关杂质，如前体、异构体及某些降解产物等，具有高度的不均一性和不确定性。蛋白质类杂质是一个普遍且相对复杂的生产问题，在生产过程中分辨所有蛋白杂质难度非常大，但为增加产品安全性，对杂蛋白进行分析和控制的重要性不言而喻。

分析蛋白杂质主要技术包含：高效液相色谱和免疫学分析（ELISA和West‐ernblot）凝胶电泳、二维电泳及质谱技术、毛细管电泳等，高效液相色谱法要求样品能制成溶液，而不需要气化，可直接用于分析难挥发、热不稳定及高分子样品，扩大了色谱法的应用范围。

微源检测查阅资料利用茵栀黄注射液为药物模型根据检测波长，采用紫外末端吸收的高效凝胶排阻色谱法对注射剂中的大分子蛋白进行了检测。

色谱条件：

精确量取2ml茵栀黄注射剂，用0.45μm微孔滤膜过滤后直接作为样品溶液,

对照品溶液称取牛血清白蛋白5.0mg，置于容量瓶中加流动相溶解，稀释制备成1000μg/mL的储备液。分别精密量取适量的储备液，加入流动相进行稀释，混匀，得到浓度为40.0，20.0，10.0，5.00，2.50，1.25，0.625，0.312μg/mL的对照品溶液；

加标样品溶液的制备：称取牛血清白蛋白3.80mg于量瓶中，加茵栀黄注射液，溶解稀释至刻度，制备成380μg/mL的储备液，量取适量的储备液，加入茵栀黄注射液进行稀释混合得到，浓度为38.0，3.80，0.380μg/mL的样品加标溶液。

取对照品溶液、样品溶液及加标样品溶液色谱条件进样分析，记录色谱图

210nm波长（a）、220nm波长（b）处牛血清白蛋白（40.0μg/mL）色谱图

目前国内在已上市的来源于微生物、植物或动物组织的蛋白质药物中，很多品种未对其生产过程引入或产品本身含有的相关杂蛋白进行研究，产品质量控制上缺少方法。本文通过茵栀黄注射剂举例为其他同类药物中的蛋白杂质的检测提供了一种可借鉴的检测方法。