建立高效液相色谱HPLC测定组氨酸含量方法

建立高效液相色谱HPLC测定组氨酸含量方法

氨基酸是组成蛋白质的基本单元，具有极其重要的生理功能。组氨酸（L-Histidine，His或H），分子式C6H9N3O2，是存在于蛋白质之中最普遍的20种氨基酸之一，一种碱性氨基酸，对成人为非必需对幼儿为必需氨基酸，现主要应用于医药工业，是氨基酸输液和综合制剂的主要成分，为了进一步提高生产率改进生产工艺，应建立一种简便的对生物制品中的组氨酸含量的检测方法。

目前，氨基酸含量检测主要应用氨基酸分析仪和高效液相色谱HPLC。氨基酸分析仪利用离子交换色谱，经过吸附、穿透、扩散、离子交换、离子亲和力等复杂的物理化学过程对氨基酸准确定量检测。高效液相色谱HPLC技术分析氨基酸也是一种较为理想的氨基酸检测方法，高效快速准确，逐步代替了氨基酸自动分析仪，实验室分享一种利用反相高效液相色谱法检测组氨酸含量的方法并通过全面的方法学验证。

考虑到组氨酸不含生色基团，无法采用常规的紫外检测器直接检测，实验条件中增加通过衍生剂，将氨基酸转化为具有较强紫外或荧光吸收的衍生物。通过样品制备、色谱柱选择、HPLC条件优化，对样品进行分析，最后对结果数据进行分析处理，得到组氨酸的含量结果。色谱条件紫外检测器检测，波长为254nm，进样体积为5μL，柱温为25℃，流速为1.0ml/min，洗脱时间为35min，洗脱方式为梯度洗脱。

利用高效液相色谱HPLC的方法具有良好的专属性、准确度、重复性、中间精密度、线性和耐用性，按照中国药典中分析方法验证指导原则和ICH协调三方指导原则Q2进行方法学验证方法，符合验收标准。是一种较为理想的检测氨基酸的方法，能够为组氨酸含量的检测提供参考，随着氨基酸的广泛应用，对氨基酸的检测分析水平也不断提高，利用组氨酸含有的咪唑基，报道也可以采用离子色谱对其含量进行检测。

利用高效液相色谱对组氨酸含量进行检测是一项复杂的过程，需要严格的实验条件和专业的操作技能。微源检测实验室采用高效液相色谱(HPLC)和液质联用(LC-MS)法，可高效、精准的检测组氨酸含量变化，为各科研院所、药企、生物技术、化工领域等企业提供高效、准确的氨基酸及其代谢物检测服务，满足质量控制和研发支持，如您有这方面的测试需求，欢迎致电咨询！