解密磺酸酯类基因毒性杂质：实验室检测方法学开发验证

解密磺酸酯类基因毒性杂质：实验室检测方法学开发验证

2007年6月，EMA在部分批次的抗艾滋病药物Viracept即奈非那韦甲磺酸盐中发现含有高剂量的基因毒性杂质甲磺酸乙酯，含量超过1.1×10-3，经自查，发现存储罐中乙醇残留，最终决定召回由罗氏制药生产的相关药物。该次事件引了国际监管部门及制药公司对基因毒性杂质的普遍关注，是后续各类关于基因毒性杂质研究要求与指导原则出台的重要推动力。

基因毒性杂质是指能直接或间接损害DNA、引起基因突变或致癌的一类物质。烷基磺酸酯和芳基磺酸酯类化合物作为潜在性基因毒性杂质，做为药品生产原料使用广泛，当甲磺酸、苯甲磺酸等磺酸盐物质与微量的低级醇在合成反应中生成烷基磺酸酯，如甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、异丙基甲磺酸酯、正丁基甲磺酸酯、芳基磺酸酯如苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯等时，这类磺酸酯杂质会与DNA发生烷基化反应，如何检测控制控制药品中磺酸酯呢？

利用检测分析技术手段研究检测磺酸酯的限度，控制该类杂质的毒理学关注阈值TTC是非常必要的，但是除了需要克服的灵敏度、选择性以及样品基质干扰等问题外，磺酸酯的高反应活性也为分析方法的开发带来了难度。微源检测实验室针对客户较关心的几种遗传毒性杂质分别建立了方法，并完成完整的方法学验证。

Ⅰ.片剂中基毒杂质苯磺酸甲酯（MBS）和苯磺酸乙酯（EBS）

微源检测参照依据《中国药典》和ICH指导原则，建立了利用液质联用法对某片剂中基毒杂质苯磺酸甲酯和苯磺酸乙酯的方法并完成方法学验证。苯磺酸甲酯和苯磺酸乙酯在各自浓度范围内线性良好，各限度加标供试品溶液中，回收率、平均回收率和总平均回收率均在91.28%~96.94%之间。方法灵敏度和准确度高，能够有效的检测苯磺酸甲酯和苯磺酸乙酯的含量。

Ⅱ.制剂中的对甲苯磺酸甲酯及对甲苯磺酸乙酯

制剂中主要成分双环醇生产工艺较为复杂，一些辅料的加入可能会产生对甲苯磺酸甲酯及对甲苯磺酸乙酯，需要对两种杂质的含量进行检测。实验室开发利用GC-MS气质联用的方法对样品进行检测，优化仪器参数，氦气作为载气，方法操作简单，灵敏度和准确度符合检测需求，色谱峰之间实现了基线分离，空白提取溶液无干扰，能够有效的检测对甲苯磺酸甲酯及对甲苯磺酸乙酯的含量。

Ⅲ.片剂中硫酸二甲酯（DMS）的含量检测

硫酸二甲酯（DMS）常用于DNA甲基化，在烷基化反应中与烷基卤化物相比有着更高的反应速率和更低的副产物产出。实验室参考FDA中硫酸二甲酯的含量测定的方法，考虑到样品本身溶解性及限度的问题，实验室采用气相色谱-质谱联用法对其进行对应的方法开发及验证。报告汇总了方法的系统适用性、专属性、溶液稳定性、定量限、检测限、线性、准确度和精密度验证结果。

采用基因毒性物质作为反应试剂和原料是不可避免的，在新药研发过程中，及时发现、认真对待可能出现的基因毒性杂质，通过评估风险、采用科学合理的方法来优化合成工艺是必须遵守的基本原则，基因毒性杂质来说，检测标准较普通杂质严格近百倍乃至千倍。

微源检测致力于成为专业杂质检测机构，根据不同基因毒性杂质的特点，开发了灵敏检测各种杂质的分析技术和研究方法，积累了丰富的基因毒性杂质研究经验，为磺酸酯类、亚硝酸类、叠氮类等基毒杂质提供风险评估、杂质项目方法开发与检测、不同监管要求下的方法验证、杂质来源调查与形成研究等技术支持。如您有相关检测需求，欢迎致电咨询！

*部分图片来源网络，如有侵权请联系删除。