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生物制品中二硫苏糖醇DTT残留检测
生物制品中二硫苏糖醇DTT残留检测
二硫苏糖醇(Dithiothreitol,简称DTT)化学式为C4H10O2S2,是一种强效的小分子有机还原剂,由于其氧化状态六元环(含二硫键)的构象稳定,还原性很强,还原状态下为线性分子,被氧化后变为包含二硫键的六元环状结构,常用于还原蛋白和多肽中的二硫键,防止蛋白半胱氨酸残基形成分子内和分子间的二硫键,降低DNA的二聚化等,应用非常广泛。
但DTT属于巯基化合物,进入体内可能会破坏蛋白质结构,引起酶失活等现象,因此需要严格监控过程中样品以及终产品中的还原剂残留量。根据目前文献报道,DTT可用钴离子反滴定、分光光度计法、反相液相色谱、液相色谱串联质谱等方法进行测定,但是由于DTT极容易被氧化的特性,钴离子反滴定以及传统分光光度灵敏度低。
微源检测实验室参考文献资料,利用LC-MS液质联用方法对某生物制品中的DTT残留含量进行检测,通过优化液相分析条件,包括色谱柱、洗脱梯度、以及流速等条件,通过制作标准样品的标准曲线,检测DTT的峰面积进行线性拟合来测定DTT浓度,检测更低浓度范围的DTT残留量,方法具有良好的专属性、精密性和准确性。
随着合成生物学的快速发展,作为常用在蛋白类生物药制品修饰过程(例如糖基化、甲基化、磷酸化、乙酰化、羟基化修饰)中的二硫苏糖醇市场需求也随之快速增长。各类检测方法也在不断进步,除液质联用外还可以运用超高效液相色谱UHPLC实现精准程度更高的检测,确保产品中的DTT含量在安全范围内,确保生物制品的安全有效。
实验室提供二硫苏糖醇DDT、异丙基硫代半乳糖苷IPTG等工艺残留检测服务,通过百余台就精密仪器平台,定制专属解决方案,可针对性的提供方法学开发、验证、转移等技术服务,专研杂质研究,为药物分析、材料化工等生产科研机构提供检测测试服务,如您有相关需求,欢迎咨询!
*部分图片来源网络,侵删。