SEC仪器原理及分子量纯度等相关测试

SEC仪器原理及分子量纯度等相关测试

体积排阻色谱法（SEC）也称为凝胶渗透色谱(GPC)，利用多孔凝胶固定相的独特特性将溶液中的高分子按照流体力学体积大小进行分离的一种液相色谱技术，较大的生物分子在孔隙中停留的时间更短，较早洗脱，较小的生物分子在孔隙中停留的时间更长，较迟洗脱，该项技术广泛应用于高分子材料、生物制药、环境分析等领域。

在生物治疗性蛋白质的开发和商业化过程中常用体积排阻色谱(SEC)分析技术，最广泛的用途是测定聚合物的分子量分布，通过与多角度激光散射（MALS）激光照射到分析物时会发生光的散射，从而直接计算出分析物的绝对分子量及分子量分布信息，具有准确度高、无需使用标准蛋白、不依赖洗脱保留时间和直接准确测定蛋白绝对分子量的特点

SEC根据其具有一定分子量分布的高聚物溶液从柱中通过时，较小的分子在柱中保留的时间比大分子保留的时间要长，于是整个样品即按分子尺寸由大到小的顺序依次流出的特性，能够高效分离分子量差异大的组分，如蛋白质、核酸和聚合物等，适用于复杂样品的初步分离和纯化，检测单抗或融合蛋白的单体纯度和聚体比例。

还可以根据SEC从污染物等低分子量物质中分离生物分子（例如蛋白质），这些污染物中可包括聚集体（单体、二聚体、三聚体、四聚体等）、赋形剂、细胞碎片及其他降解产生的杂质。通过优化和改进SEC-HPLC方法，提高蛋白质纯度分析的准确性和灵敏度，为蛋白质研究和生物药物开发提供可靠的数据支持。

建立SEC方法时，应对多个条件进行评估，包括流动相（pH和离子强度）、流速以及色谱柱长度，选用分子量范围能覆盖所有样品组分分子量的色谱柱，除了根据样品分子量选择固定相的孔径大小外，还需根据样品特征选择固定相种类，使分子量-洗脱体积曲线的线性范围与待测样品的分子量范围匹配。

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