宿主细胞蛋白HCP残留检测方法

宿主细胞蛋白HCP残留检测方法

 

宿主细胞是生产诸如重组蛋白、抗体药物或疫苗药物时最常使用的关键起始材料。宿主细胞蛋白(hostcellprotein,HCP)细菌细胞(如大肠杆菌)、酵母细胞(如酿酒酵母)和哺乳动物细胞(中国仓鼠卵巢CHO细胞)等宿主细胞分泌的蛋白以及细胞凋亡、代谢产生的部分结构蛋白。

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宿主细胞残留蛋白通常被视为关键质量属性,许多国家和地区的药品监管机构都要求生物药物在上市前必须进行HCP残留的检测确保药物的安全性和有效性,避免导致患者的免疫反应等制药企业应严格遵守相关法规要求,采用合适的检测方法和控制策略,确保HCP残留量在可接受范围内。

 

工艺残留蛋白质检测是生物制品质量控制的核心环节,实验室对宿主残留蛋白HCP残留检测方法,可分为毛细管电泳法酶联免疫吸附法(ELISA)质谱分析等技术方法。毛细管电泳法利用电场中蛋白迁移率差异实现分离检测。优势是能够快速、低样品消耗、适合电荷异质性分析确定是灵敏度较低,多用于纯度分析而非痕量残留检测。

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ELISA技术依赖于抗体识别对HCP蛋白进行定性与定量分析,是目前应用最广泛的技术。流程为:包被捕获抗体→封闭→加样→检测抗体→酶标二抗→底物显色→OD值测定。具有灵敏度(ng/mL级)、高通量、操作标准化。但是应用ELISA技术对HCP蛋白进行准确的定性与定量分析的前提是有这些HCP蛋白的标准品以及对应的抗体。

 

LC-MS技术进行HCP蛋白的定性与定量能够避免EILSA方法中由于抗体缺失导致的定性与定量不准确。结合前端的液相分离手段,可以对复杂的多肽进行分离,进一步提高质谱的检测灵敏度以及动态范围。经高分辨质谱测定得到一级及二级质谱图,并进行序列库搜索匹配后,可得到HCP蛋白的种类列表在复杂场景中尝试采用无需抗体具有高特异性。

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微源检测专注杂质研究,根据产品类型、工艺阶段和监管要求选择合适检测方法建立残留分析方法开发和验证,帮助监测生产工艺确保生物制品的质量和安全通过开发方法助力企业工艺优化、关键质量参数评价以及产品放行等工作,致力于为各药企,生物工程企业,科研院所等企业,提供高效准确的优质检测技术服务。若有相关需求,欢迎咨询。

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创建时间:2025-06-11 13:42
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